Сабж: а можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? Интересно вот стало. Спасибо за ответы!

РЕАГЕНТЫ
1. Карболовый раствор генцианвиолета 1 фл (100 мл)
2. Раствор Люголя 1 фл (100 мл)
3. Фуксин Циля 1 фл (10мл)

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол.
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе .
Либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх.
Перед использованием фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой. (Из расчета - к 1 мл фуксина добавляют 9 мл дистиллированной воды).

МЕТОДИКА ОКРАСКИ
1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдерживают 2-3 минуты. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и споласкивают в проточной воде (до 30 сек).
2. Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата.
3. Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной).
4. Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают. Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 сек. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с.
5. Тщательно промывают стекло в проточной или дистиллированной воде 1-2 мин
6. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают рабочим фуксином Циля (несколько капель) в течение 1-3 минут.
7. Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

Ага. А в моей методичке(записывал, когда ещё в школе были практики в универе у микробиологов - к олимпиадам готовились) был просто раствор фуксина в воде с парой капель спирта. Значит и Цилем можно. Спасибо! А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять?

Сафранин применяется в виде водных и водно-спиртовых растворов.
1) 0,2 — 0,5% водный раствор сафранина
2) 0,25% раствор сафранина в 10 % спирте.

Спасибо!

у нам была е*нутая завкафедры, вплоть до того, что этаж закрывала, что бы никто не зашел. Первый практикум у меня был покрасить образец по Ожешко, делали вчетвером и получили по "Банану" каждый.

Я по этому и не любил практикумы. Вечно собирается толпа возле стола да так что не подступишся. Но самое главное, что ничего путного тоже не сделаешь. Микробиология в целом мне нравилась, неприятный осадок оставило лишь свинство на сессии. А вот "бананов" полученных за практикумы (и не только) я поел на биохимии. Но там ко мне предвзято относилась бабушка-препод. Хоть какая-то ошибка сразу "банан". Мало того что на сессию чуть не опоздал, так еще и на экзамене потом боялся к ней попасть (иначе гарантия, что все лето с учебником в обнимку провел бы). Но самое главное я так и не понял чем снискал к себе такое отношение. Хотя это уже совсем другая тема.

Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют?

0,2 г метилового красного растворяют в 500 мл 95% этанола, затем к полученному раствору добавляют 500 мл дистиллированной воды.
Потом готовят т.н. MRVP-среду:
K₂HPO₄ – 5 г
Пептон – 5 г
Глюкоза – 5 г
Дист. вода - до 1 л
Суспендируют все ингридиенты в дист. воде при слабом нагреве. При этом нужно избегать изменения рН. Отбирают 5 мл готовой среды и помещают в тестовые трубки (пробирки). Которые затем стерилизуют при 121⁰С в течении 15 мин.
В тестовые пробирки засевается исследуемая культура (часть пробирок остается незасеянной - контрольный опыт).
Пробирки помещают в термостат на 48 ч при 37⁰С.
После инкубации в каждую пробирку капают 3-4 капли приготовленного раствора метилового красного.
Результаты:
Желтый цвет - отрицательный.
Красный цвет (с различными оттенками) - положительный.

Ага, то есть 50% этанол. Спасибо! А как среда думаю и LB(Luria-Bertani) подойдёт.

Только учтите, что раствор спирта готовится по весу, а не по объему.
P.S. Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология").

Но указано-то в миллилитрах. Или я чего недопонимаю. Да, тему можно переименовать. Даже лучше переименовать. Между прочим, думаю у каждого есть запасы зелёнки - бриллиантового залёного. Её где-то в микробиологии применить можно?

Было бы хорошо, но нужно согласие автора.

Да есть, есть согласие. В предыдущем моём посте ещё.) Завтра ещё фото красителей выложу, кстати.

Спиртовые растворы готовятся по весу, а отпускаются по объему. - мнемоническое правило по ТЛФ.
Если Вы решили готовить по методике ничего страшного нет. А вот если хотите слить растворы заранее, то концентрация там будет совсем другая (вовсе не 50%) - контракция будь она не ладна. Да и метилрот может хуже растворяться. Так что лучше делать по методике.

Можете сделать это сами отредактировав Ваше первое сообщение в теме. В заголовке вписываете нужное название, а вопрос касательно фуксина переносите в тело сообщения (чтобы было понятно о чем речь).

"Зеленка" используется:
- для приготовления плотных сред Левенштейна-Йенсена и Финн - II (обнаружение M. tuberculosis).
- для приготовления агаровой питательной среды с бриллиантовым зелёным, предназначенной для пересева культур и идентификации бактерий рода Salmonella (среда Кауффмана).

Спасибо! Только зелёнка за время хранения высохла.( Её как растворять?

Бриллиантовый зеленый растворим в спирте.

Это понятно. Но какую концентрацию брать?

Готовят спиртовой раствор-заготовку который потом разводят водой до необходимой концентрации. Концентрации позже посмотрю в справочнике.

Растворяют в спирте. Готовят 0,5% спиртовой раствор который затем разводят водой, либо добавляют в среду в без разведения (количества мизерные - единицы мг в пересчете на сухой краситель).

Есть в нем немного и про среды с бриллиантовым зеленым.