На главную страницу сайта Опыты по химии Химический Юмор. Научный Юмор Опыты по физике    



Форум Химиков - Энтузиастов. Химия и Химики

Эксперименты по Химии - Практическая Химия - Книги по Химии - Физика – Астрономия – Биология – Научный Юмор
Прежде чем отправить свое сообщение - ознакомьтесь с ПРАВИЛАМИ ФОРУМА.
Прежде чем создать новую тему - воспользуйтесь ПОИСКОМ, возможно, аналогичная тема уже есть

All times are UTC [ DST ]




Post new topic Reply to topic  [ 145 posts ]  Go to page Previous  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8  Next
Author Message
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 12 Jan 2015 18:39 
Offline
Посетитель
Посетитель
User avatar

Joined: 12 Jan 2015 02:53
Posts: 10
К сожалению не могу отвечать в личку из-за недавней регистрации. Буду благодарен, если поделитесь.

Quote:
и у кого можно приобрести культуру E. coli с плазмидом

плазмидой, конечно же


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 12 Jan 2015 19:09 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 10 Mar 2013 19:12
Posts: 205
Scoon wrote:
К сожалению не могу отвечать в личку из-за недавней регистрации. Буду благодарен, если поделитесь.

Раздавать буду здесь. http://forum.diybio.club/viewforum.php?f=20 Условия и способы будут описаны там же. Плазмида с лак опероном, кстати..
Сейчас на раздачу есть оризалин для получения полиплоидов.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 02:51 
Offline
Посетитель
Посетитель
User avatar

Joined: 12 Jan 2015 02:53
Posts: 10
Quote:
Плазмида с лак опероном, кстати..

"Течет", или требуется дополнительная активация?


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 05:39 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 10 Mar 2013 19:12
Posts: 205
Scoon wrote:
Quote:
Плазмида с лак опероном, кстати..

"Течет", или требуется дополнительная активация?

Я активировал IPTG, но думаю и аутоиндукция прокатит. Где-то были протоколы.
Аутоиндукцию конечно попробую.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 20:55 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:00 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:14 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 10 Mar 2013 19:12
Posts: 205
Dorif wrote:
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.

А мне они так ничего и не прислали( Хз почему..


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:17 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 10 Mar 2013 19:12
Posts: 205
Dorif wrote:
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.

Если ты про растения in vitro то тут важнее асептика чем реактивы. Или ламинар или хорошо продуманный глав бокс. Сейчас дописываю основные отчерки по конструкции с описанием частых ошибок и "подводных камней" при изготовлении оного.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:36 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Кстати, а кто пробовал термостат из 2 аквариумов делать? Я поместил меньший аквариум в больший, между ними налил воду. Поставил нагреватели воды для аквариумов(на них есть регулировка температуры), Всё это закрывается куском пластика в качестве крышки. Для пущей теплоизоляции можно обложить пенопластом.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:41 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Tigtinc wrote:
Dorif wrote:
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.

А мне они так ничего и не прислали( Хз почему..

Ну, у меня есть. Только во время ремонта мои эшерихии JM109(и чистые и с плазмидами) сдохли. :( :( :( Теперь у меня только Bacillus cereus 6А6, Bacillus thuringiensis(на развалинах БЗР откопал битоксибациллин), Acinetobacter calcoaceticus,Candida guillermondii, да дрожжи хлебопекарные ибо они лиофилизированные были.

Так что мне сначала надо найти новый штамм-носитель для плазмиды. Пламиды остались замороженными в морозильнике.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:43 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Tigtinc wrote:
Dorif wrote:
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.

Если ты про растения in vitro то тут важнее асептика чем реактивы. Или ламинар или хорошо продуманный глав бокс. Сейчас дописываю основные отчерки по конструкции с описанием частых ошибок и "подводных камней" при изготовлении оного.

Не, я про смародёренное оборудование и реактивы. Лабораторный корпус стоит, никому не нужный и не охраняемый. Мародерю, чтоб не пропало.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 21:55 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Есть идеи, как можно сделать срез собственной кожи, не нанеся при этом себе каких-то серьёзных повреждений? Хочу попробовать клетки фибробластов вырастить свои же.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 22:47 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 07 Nov 2014 13:50
Posts: 3099
Location: Киев
В идеале, конечно, нужен стилет для биопсии кожи...
Attachment:
epitheasy1000[1].png
epitheasy1000[1].png [ 244.5 KiB | Viewed 14087 times ]

Attachment:
melanoma-2[1].jpg
melanoma-2[1].jpg [ 23.45 KiB | Viewed 14087 times ]

...они одноразовые и продаются в аптеках

Меня только смущает, что для получения фибробластов нужно делать глубокий надрез, легкий - заберет только кератиноциты.

Attachment:
2468756-6[1].jpg
2468756-6[1].jpg [ 95.91 KiB | Viewed 14087 times ]

полноценная форма биопсии

Есть ещё такой вариант - аккуратно выдернуть живой волос, если всё сделать правильно, то в корневой части будут и фибробласты и некоторое кол-во стволовых клеток. :-)


Top
 Profile  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 23:16 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
А НЕ в идеале? А то я сомневаюсь, что в наших условиях идеал возможен.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 15 Jan 2015 23:45 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Если что - гиподерма на какой глубине начинается и на какой закнчивается? Тогда уж скальпелем управиться можно, если стилет не найду.

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 16 Jan 2015 00:09 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 07 Nov 2014 13:50
Posts: 3099
Location: Киев
Фибробласты в дерме (1,2-1,5 мм), в гиподерму лезть не надо. Но в дерме и капилляры, так что будет легкое кровотечение.
Простейший способ - пинцетом захватить маленький участок кожи, оттянуть и отрезать скальпелем/ножницами. Проделывают это на верхней наружной поверхности бедра (ближе к тазу).
Attachment:
sbp7t[1].jpg
sbp7t[1].jpg [ 4.94 KiB | Viewed 14018 times ]

вся процедура на англицком


Top
 Profile  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 16 Jan 2015 02:04 
Offline
Посетитель
Посетитель
User avatar

Joined: 12 Jan 2015 02:53
Posts: 10
Так, прислали амплификатор и пипетки:
Attachment:
R8diwSnLhL0[1].jpg
R8diwSnLhL0[1].jpg [ 55.56 KiB | Viewed 14018 times ]

Attachment:
lQeAD7f52Q0[1].jpg
lQeAD7f52Q0[1].jpg [ 96.77 KiB | Viewed 14018 times ]

Сейчас сооружаю термостат, съезжу за агаром, и через недельку начну практиковаться в выращивании E. coli. Плазмиды с Альдерона заказал - не помешают.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 16 Jan 2015 02:11 
Offline
Посетитель
Посетитель
User avatar

Joined: 12 Jan 2015 02:53
Posts: 10
Dorif wrote:
Кстати, а кто пробовал термостат из 2 аквариумов делать? Я поместил меньший аквариум в больший, между ними налил воду. Поставил нагреватели воды для аквариумов(на них есть регулировка температуры), Всё это закрывается куском пластика в качестве крышки. Для пущей теплоизоляции можно обложить пенопластом.


Я такую конструкцию сооружаю: коробка из прессованного пенопласта для сухого льда, в качестве нагревателя - 100 вт лампа, завернутая в медную фольгу (для лучшей теплоотдачи), ее обдувает 60мм вентилятор с регулируемым числом оборотов. Блок управления - контроллер Attiny2313, термодатчик - DS18B20, лампа подключена через тиристор и оптрон. Как закончу конструкцию - выложу подробное описание, схему и прошивку.


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 17 Jan 2015 03:47 
Offline
Гуру
Гуру
User avatar

Joined: 26 Jan 2012 23:34
Posts: 1169
Location: Кишинёв, Молдова
Taq полимераза должна по идее пережить транспортировку при комнатной температуре?

_________________
Сыплется с неба пепел взрывов,
Ночь за окном темна.
Вот и пришла моя погибель -
Ядерная война!


Top
 Profile E-mail  
 
 Post subject: Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
PostPosted: 18 Jan 2015 06:21 
Offline
Участник
Участник
User avatar

Joined: 10 Mar 2013 19:12
Posts: 205
Группа во ВК. растет. :))
https://vk.com/club83904345


Scoon wrote:
Я такую конструкцию сооружаю.

Добавь к лампе регулировку по ШИМ, иначе в фольге будет быстро перегорать. И вообще лучше термошнур для террариума.


Top
 Profile E-mail  
 
Display posts from previous:  Sort by  
Post new topic Reply to topic  [ 145 posts ]  Go to page Previous  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8  Next

All times are UTC [ DST ]


Who is online

Users browsing this forum: No registered users and 27 guests


You cannot post new topics in this forum
You cannot reply to topics in this forum
You cannot edit your posts in this forum
You cannot delete your posts in this forum
You cannot post attachments in this forum

Search for:
Jump to:  

[Сообщить об ошибке, испорченном вложении, битой ссылке]
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group