Форум Химиков - Энтузиастов. Химия и Химики
http://chemistry-chemists.com/forum/

Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
http://chemistry-chemists.com/forum/viewtopic.php?f=61&t=3492		 Page 5 of 8
Author:  Scoon [ 12 Jan 2015 18:39 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
К сожалению не могу отвечать в личку из-за недавней регистрации. Буду благодарен, если поделитесь.

Quote:
и у кого можно приобрести культуру E. coli с плазмидом

плазмидой, конечно же
Author:  Tigtinc [ 12 Jan 2015 19:09 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Scoon wrote:
К сожалению не могу отвечать в личку из-за недавней регистрации. Буду благодарен, если поделитесь.

Раздавать буду здесь. http://forum.diybio.club/viewforum.php?f=20 Условия и способы будут описаны там же. Плазмида с лак опероном, кстати..
Сейчас на раздачу есть оризалин для получения полиплоидов.
Author:  Scoon [ 15 Jan 2015 02:51 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Quote:
Плазмида с лак опероном, кстати..

"Течет", или требуется дополнительная активация?
Author:  Tigtinc [ 15 Jan 2015 05:39 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Scoon wrote:
Quote:
Плазмида с лак опероном, кстати..

"Течет", или требуется дополнительная активация?

Я активировал IPTG, но думаю и аутоиндукция прокатит. Где-то были протоколы.
Аутоиндукцию конечно попробую.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 20:55 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 21:00 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.
Author:  Tigtinc [ 15 Jan 2015 21:14 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Dorif wrote:
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.

А мне они так ничего и не прислали( Хз почему..
Author:  Tigtinc [ 15 Jan 2015 21:17 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Dorif wrote:
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.

Если ты про растения in vitro то тут важнее асептика чем реактивы. Или ламинар или хорошо продуманный глав бокс. Сейчас дописываю основные отчерки по конструкции с описанием частых ошибок и "подводных камней" при изготовлении оного.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 21:36 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Кстати, а кто пробовал термостат из 2 аквариумов делать? Я поместил меньший аквариум в больший, между ними налил воду. Поставил нагреватели воды для аквариумов(на них есть регулировка температуры), Всё это закрывается куском пластика в качестве крышки. Для пущей теплоизоляции можно обложить пенопластом.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 21:41 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Tigtinc wrote:
Dorif wrote:
Кстати, одна из плазмид Aldevron, о которых я писал раньше, подходит для создания ретровирусного вектора, т.к. содержит длинный концевой повтор вируса гепатита. только ген поверхностного антигена вируса гепатита надо будет заменить на нужный вам ген.

А мне они так ничего и не прислали( Хз почему..

Ну, у меня есть. Только во время ремонта мои эшерихии JM109(и чистые и с плазмидами) сдохли. :( :( :( Теперь у меня только Bacillus cereus 6А6, Bacillus thuringiensis(на развалинах БЗР откопал битоксибациллин), Acinetobacter calcoaceticus,Candida guillermondii, да дрожжи хлебопекарные ибо они лиофилизированные были.

Так что мне сначала надо найти новый штамм-носитель для плазмиды. Пламиды остались замороженными в морозильнике.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 21:43 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Tigtinc wrote:
Dorif wrote:
Про обмен/передачу безвозмездно: до сих пор мародёрю на развалинах НИИ Биозащиты Растений. Может и я смогу что выставить. Предметные стёкла, чашки Петри, пробирки, мерные колбы, штативы для пробирок, планшеты. Ну и ПЭГ, поливинилпироллидон, 2-поливинилпиридин и прочее, что в больших количествах найду.

Если ты про растения in vitro то тут важнее асептика чем реактивы. Или ламинар или хорошо продуманный глав бокс. Сейчас дописываю основные отчерки по конструкции с описанием частых ошибок и "подводных камней" при изготовлении оного.

Не, я про смародёренное оборудование и реактивы. Лабораторный корпус стоит, никому не нужный и не охраняемый. Мародерю, чтоб не пропало.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 21:55 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Есть идеи, как можно сделать срез собственной кожи, не нанеся при этом себе каких-то серьёзных повреждений? Хочу попробовать клетки фибробластов вырастить свои же.
Author:  Zaec [ 15 Jan 2015 22:47 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
В идеале, конечно, нужен стилет для биопсии кожи...
Attachment:
epitheasy1000[1].png
epitheasy1000[1].png [ 244.5 KiB | Viewed 14224 times ]

Attachment:
melanoma-2[1].jpg
melanoma-2[1].jpg [ 23.45 KiB | Viewed 14224 times ]

...они одноразовые и продаются в аптеках

Меня только смущает, что для получения фибробластов нужно делать глубокий надрез, легкий - заберет только кератиноциты.

Attachment:
2468756-6[1].jpg
2468756-6[1].jpg [ 95.91 KiB | Viewed 14224 times ]

полноценная форма биопсии

Есть ещё такой вариант - аккуратно выдернуть живой волос, если всё сделать правильно, то в корневой части будут и фибробласты и некоторое кол-во стволовых клеток. :-)
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 23:16 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
А НЕ в идеале? А то я сомневаюсь, что в наших условиях идеал возможен.
Author:  Dorif [ 15 Jan 2015 23:45 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Если что - гиподерма на какой глубине начинается и на какой закнчивается? Тогда уж скальпелем управиться можно, если стилет не найду.
Author:  Zaec [ 16 Jan 2015 00:09 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Фибробласты в дерме (1,2-1,5 мм), в гиподерму лезть не надо. Но в дерме и капилляры, так что будет легкое кровотечение.
Простейший способ - пинцетом захватить маленький участок кожи, оттянуть и отрезать скальпелем/ножницами. Проделывают это на верхней наружной поверхности бедра (ближе к тазу).
Attachment:
sbp7t[1].jpg
sbp7t[1].jpg [ 4.94 KiB | Viewed 14155 times ]

вся процедура на англицком
Author:  Scoon [ 16 Jan 2015 02:04 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Так, прислали амплификатор и пипетки:
Attachment:
R8diwSnLhL0[1].jpg
R8diwSnLhL0[1].jpg [ 55.56 KiB | Viewed 14155 times ]

Attachment:
lQeAD7f52Q0[1].jpg
lQeAD7f52Q0[1].jpg [ 96.77 KiB | Viewed 14155 times ]

Сейчас сооружаю термостат, съезжу за агаром, и через недельку начну практиковаться в выращивании E. coli. Плазмиды с Альдерона заказал - не помешают.
Author:  Scoon [ 16 Jan 2015 02:11 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Dorif wrote:
Кстати, а кто пробовал термостат из 2 аквариумов делать? Я поместил меньший аквариум в больший, между ними налил воду. Поставил нагреватели воды для аквариумов(на них есть регулировка температуры), Всё это закрывается куском пластика в качестве крышки. Для пущей теплоизоляции можно обложить пенопластом.


Я такую конструкцию сооружаю: коробка из прессованного пенопласта для сухого льда, в качестве нагревателя - 100 вт лампа, завернутая в медную фольгу (для лучшей теплоотдачи), ее обдувает 60мм вентилятор с регулируемым числом оборотов. Блок управления - контроллер Attiny2313, термодатчик - DS18B20, лампа подключена через тиристор и оптрон. Как закончу конструкцию - выложу подробное описание, схему и прошивку.
Author:  Dorif [ 17 Jan 2015 03:47 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Taq полимераза должна по идее пережить транспортировку при комнатной температуре?
Author:  Tigtinc [ 18 Jan 2015 06:21 ]
Post subject:  Re: Биохакеры: молекулярная биология в стиле «сделай сам»
Группа во ВК. растет. :))
https://vk.com/club83904345


Scoon wrote:
Я такую конструкцию сооружаю.

Добавь к лампе регулировку по ШИМ, иначе в фольге будет быстро перегорать. И вообще лучше термошнур для террариума.
Page 5 of 8 All times are UTC [ DST ]
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group
http://www.phpbb.com/