Форум Химиков - Энтузиастов. Химия и Химики http://chemistry-chemists.com/forum/ |
|
Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология http://chemistry-chemists.com/forum/viewtopic.php?f=61&t=3588 |
Page 1 of 4 |
Author: | Dorif [ 06 Aug 2012 22:15 ] |
Post subject: | Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология |
Сабж: а можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? Интересно вот стало. Спасибо за ответы! |
Author: | Upsidesium [ 06 Aug 2012 22:33 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
РЕАГЕНТЫ 1. Карболовый раствор генцианвиолета 1 фл (100 мл) 2. Раствор Люголя 1 фл (100 мл) 3. Фуксин Циля 1 фл (10мл) ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол. Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе . Либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Перед использованием фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой. (Из расчета - к 1 мл фуксина добавляют 9 мл дистиллированной воды). МЕТОДИКА ОКРАСКИ 1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдерживают 2-3 минуты. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и споласкивают в проточной воде (до 30 сек). 2. Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата. 3. Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной). 4. Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают. Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 сек. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с. 5. Тщательно промывают стекло в проточной или дистиллированной воде 1-2 мин 6. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают рабочим фуксином Циля (несколько капель) в течение 1-3 минут. 7. Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой. Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом. |
Author: | Dorif [ 06 Aug 2012 22:43 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
Ага. А в моей методичке(записывал, когда ещё в школе были практики в универе у микробиологов - к олимпиадам готовились) был просто раствор фуксина в воде с парой капель спирта. Значит и Цилем можно. Спасибо! А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять? |
Author: | Upsidesium [ 06 Aug 2012 23:16 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
Dorif wrote: А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять? Сафранин применяется в виде водных и водно-спиртовых растворов. 1) 0,2 — 0,5% водный раствор сафранина 2) 0,25% раствор сафранина в 10 % спирте. |
Author: | Dorif [ 06 Aug 2012 23:48 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
upsidesium wrote: Dorif wrote: А сафранин можно тоже в виде карболового р-ра применять? Сафранин применяется в виде водных и водно-спиртовых растворов. 1) 0,2 — 0,5% водный раствор сафранина 2) 0,25% раствор сафранина в 10 % спирте. Спасибо! |
Author: | нОль [ 07 Aug 2012 01:47 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
у нам была е*нутая завкафедры, вплоть до того, что этаж закрывала, что бы никто не зашел. Первый практикум у меня был покрасить образец по Ожешко, делали вчетвером и получили по "Банану" каждый. |
Author: | Upsidesium [ 07 Aug 2012 02:13 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в оксраске по Граму? |
нОль wrote: Первый практикум у меня был покрасить образец по Ожешко, делали вчетвером и получили по "Банану" каждый. Я по этому и не любил практикумы. Вечно собирается толпа возле стола да так что не подступишся. Но самое главное, что ничего путного тоже не сделаешь. Микробиология в целом мне нравилась, неприятный осадок оставило лишь свинство на сессии. А вот "бананов" полученных за практикумы (и не только) я поел на биохимии. Но там ко мне предвзято относилась бабушка-препод. Хоть какая-то ошибка сразу "банан". Мало того что на сессию чуть не опоздал, так еще и на экзамене потом боялся к ней попасть (иначе гарантия, что все лето с учебником в обнимку провел бы). Но самое главное я так и не понял чем снискал к себе такое отношение. Хотя это уже совсем другая тема. |
Author: | Dorif [ 07 Aug 2012 23:59 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют? |
Author: | Upsidesium [ 08 Aug 2012 01:02 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
Dorif wrote: Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют? 0,2 г метилового красного растворяют в 500 мл 95% этанола, затем к полученному раствору добавляют 500 мл дистиллированной воды. Потом готовят т.н. MRVP-среду: K2HPO4 – 5 г Пептон – 5 г Глюкоза – 5 г Дист. вода - до 1 л Суспендируют все ингридиенты в дист. воде при слабом нагреве. При этом нужно избегать изменения рН. Отбирают 5 мл готовой среды и помещают в тестовые трубки (пробирки). Которые затем стерилизуют при 1210С в течении 15 мин. В тестовые пробирки засевается исследуемая культура (часть пробирок остается незасеянной - контрольный опыт). Пробирки помещают в термостат на 48 ч при 370С. После инкубации в каждую пробирку капают 3-4 капли приготовленного раствора метилового красного. Результаты: Желтый цвет - отрицательный. Красный цвет (с различными оттенками) - положительный. |
Author: | Dorif [ 08 Aug 2012 01:15 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
upsidesium wrote: Dorif wrote: Кстати, для метилрот(MR) теста метилрот в чём растворяют? 0,2 г метилового красного растворяют в 500 мл 95% этанола, затем к полученному раствору добавляют 500 мл дистиллированной воды. Ага, то есть 50% этанол. Спасибо! А как среда думаю и LB(Luria-Bertani) подойдёт. |
Author: | Upsidesium [ 08 Aug 2012 01:52 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
Только учтите, что раствор спирта готовится по весу, а не по объему. P.S. Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология"). |
Author: | Dorif [ 08 Aug 2012 02:00 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
upsidesium wrote: Только учтите, что раствор спирта готовится по весу, а не по объему. P.S. Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология"). Но указано-то в миллилитрах. Или я чего недопонимаю. Да, тему можно переименовать. Даже лучше переименовать. Между прочим, думаю у каждого есть запасы зелёнки - бриллиантового залёного. Её где-то в микробиологии применить можно? |
Author: | Volodymyr [ 08 Aug 2012 02:08 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
upsidesium wrote: Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология"). Было бы хорошо, но нужно согласие автора. |
Author: | Dorif [ 08 Aug 2012 02:09 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
Vladimir wrote: upsidesium wrote: Осмелюсь предложить переименовать тему (например "Вопросы по микробиологии" или "Практическая микробиология"). Было бы хорошо, но нужно согласие автора. Да есть, есть согласие. В предыдущем моём посте ещё.) Завтра ещё фото красителей выложу, кстати. |
Author: | Upsidesium [ 08 Aug 2012 02:37 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
Dorif wrote: Но указано-то в миллилитрах. Или я чего недопонимаю. Спиртовые растворы готовятся по весу, а отпускаются по объему. - мнемоническое правило по ТЛФ. Если Вы решили готовить по методике ничего страшного нет. А вот если хотите слить растворы заранее, то концентрация там будет совсем другая (вовсе не 50%) - контракция будь она не ладна. Да и метилрот может хуже растворяться. Так что лучше делать по методике. Dorif wrote: Да, тему можно переименовать. Даже лучше переименовать. Можете сделать это сами отредактировав Ваше первое сообщение в теме. В заголовке вписываете нужное название, а вопрос касательно фуксина переносите в тело сообщения (чтобы было понятно о чем речь). "Зеленка" используется: - для приготовления плотных сред Левенштейна-Йенсена и Финн - II (обнаружение M. tuberculosis). - для приготовления агаровой питательной среды с бриллиантовым зелёным, предназначенной для пересева культур и идентификации бактерий рода Salmonella (среда Кауффмана). |
Author: | Dorif [ 08 Aug 2012 14:50 ] |
Post subject: | Re: А можно ли применить фуксин Циля в окраске по Граму? |
upsidesium wrote: [ "Зеленка" используется: - для приготовления плотных сред Левенштейна-Йенсена и Финн - II (обнаружение M. tuberculosis). - для приготовления агаровой питательной среды с бриллиантовым зелёным, предназначенной для пересева культур и идентификации бактерий рода Salmonella (среда Кауффмана). Спасибо! Только зелёнка за время хранения высохла.( Её как растворять? |
Author: | Volodymyr [ 08 Aug 2012 15:42 ] |
Post subject: | Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология |
Бриллиантовый зеленый растворим в спирте. |
Author: | Dorif [ 08 Aug 2012 17:18 ] |
Post subject: | Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология |
Vladimir wrote: Бриллиантовый зеленый растворим в спирте. Это понятно. Но какую концентрацию брать? |
Author: | Upsidesium [ 08 Aug 2012 17:55 ] |
Post subject: | Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология |
Готовят спиртовой раствор-заготовку который потом разводят водой до необходимой концентрации. Концентрации позже посмотрю в справочнике. |
Author: | Upsidesium [ 09 Aug 2012 02:20 ] |
Post subject: | Re: Вопросы по микробиологии, Практическая микробиология |
Растворяют в спирте. Готовят 0,5% спиртовой раствор который затем разводят водой, либо добавляют в среду в без разведения (количества мизерные - единицы мг в пересчете на сухой краситель). Attachment:
ОБ УНИФИКАЦИИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ (БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ) МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ... .pdf [777.36 KiB]
Downloaded 811 times Есть в нем немного и про среды с бриллиантовым зеленым. |
Page 1 of 4 | All times are UTC [ DST ] |
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group http://www.phpbb.com/ |